产品货号：
KL220725
中文名称：
单细胞RNA反转录试剂盒
英文名称：
Single Cell RNA Reverse Transcription Kit
产品规格：
200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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单细胞是非常重要的实验材料，但是由于单细胞中的RNA很少，一个人体细胞只有6pg的基因组DNA，一个小鼠胚胎干细胞只有2万多个mRNA分子，一个小鼠成纤维细胞只有50万个mRNA分子。因此单个细胞根本没法用来进行核酸纯化。为了克服次缺点，本公司开发了单细胞反转录试剂盒。
- 直接用1～500个细胞进行逆转录，免去RNA纯化过程中不可避免的RNA丢失。
- 得到的cDNA可以用于RT和PCR分离的两步法RT-PCR，方便用户用珍贵的cDNA进行更多靶基因的后续染料法或探针法qPCR检测。
- 所含RNA保护剂可有效抑制RNA的降解。
- 所含保护剂能有效克服痕量RNA因非特异性吸附产品的丢失。
| 组分 | 规格 |
| 单细胞裂解液（RNA专用） | 1mL |
| 5×单细胞RT Buffer A | 400μL |
| 5×单细胞RT Buffer B | 400μL |
| 单细胞专用MMLV | 100μL |
保存：-20℃，有效期1年。
本试剂盒足够进行200次5μL体系的单细胞裂解和200次10μL体系的逆转录。
制备单细胞所需试剂
- 用户需要根据样本细胞种类选用合适的方法（如胰酶消化）制备单细胞悬液，对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如卵细胞），则可以跳过此步。
- 本试剂盒不含相关试剂。
- 将5.5μL单细胞裂解液（RNA专用）预先分装到0.2mL PCR管中或96孔板中，分装的管数根据样品数决定。
- 用流式细胞仪或在倒置显微镜下用液压显微操作器将1～500个细胞转移到上步所得的、预装了裂解液的PCR管或96孔板中。
- 细胞进入裂解液后，裂解即发生。细胞裂解后在常温最多只能放5小时。
- 如果不需要立即使用，必须将样品放-80℃长期保存。细胞裂解液可以反复冻融最多5次。
- 如果立即使用，则在裂解样品中加入2μL 5×单细胞RT Buffer A。
- 65℃保温5分钟后立即放冰上。
- 加入2μL 5×单细胞RT Buffer B。
- 加入0.5μL单细胞专用MMLV，轻柔吹打混匀，总体系为10μL。
- 在PCR仪上按下列参数进行逆转录反应：25℃保温5分钟，50℃保温60分钟，55℃保温15分钟，70℃保温15分钟。
- 所得cDNA可以直接用于后续PCR，也可以放-20℃长期保存。
后续染料法qPCR(本制品不含相关试剂，操作过程仅供参考)：
- 加入50μL自备超纯水到10μL cDNA中稀释cDNA。
- 取3μL上步所得cDNA稀释液作为PCR模板，加入浓度为4μM的自备PCR引物各1μL，加入5μL 2×染料法PCR Mix，总体积为10μL。
- 根据选定的PCR程序进行染料法qPCR并进行溶解曲线分析。
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